以下是對液相色譜調試流程的詳細闡述:
一、調試前準備
1. 環境與設備檢查:確保實驗室環境符合要求(溫度20-25℃,濕度40%-60%),避免振動、電磁干擾及陽光直射。檢查電源、廢液管連接是否牢固,腐蝕性試劑需做好防護。
2. 流動相配制與處理:按分析方法配制流動相(如甲醇-水混合液),經0.45μm濾膜過濾后超聲脫氣15-20分鐘,去除氣泡。
3. 色譜柱與耗材準備:確認色譜柱型號匹配分析需求,檢查柱芯完好性及接頭密封性;準備好進樣針、樣品瓶等潔凈耗材。
二、系統組件調試
1. 泵系統調試:通過Purge閥以5-10mL/min流速沖洗泵頭及管路,輕敲管路排除氣泡。使用容量瓶收集液體計時稱重,誤差需≤±2%。設置梯度程序運行空白周期,觀察壓力變化平滑度。
2. 進樣器校準:檢查進樣針密封性,用標準液反復吸排消除氣泡。連續進樣5次標準品,計算RSD值≤2%,超標時需清洗定量環或調整推針速度。
3. 檢測器調試:使用萘甲醇溶液(220nm/285nm)或汞燈特征波長校準,誤差≤±1nm。流通池污染時用甲醇沖洗,氣泡殘留需重新排液。
三、色譜柱安裝與平衡
1. 色譜柱活化:新柱或久置柱需用純有機溶劑(如甲醇)以1.0mL/min沖洗30-60分鐘,激活固定相。
2. 系統平衡:切換至分析流動相,以1.0mL/min流速沖洗系統,同步開啟柱溫箱(如30℃)。監測基線漂移≤0.001AU/h、噪聲≤0.0005AU時視為平衡完成。
四、性能驗證與參數優化
1. 分離度測試:相鄰峰分離度≥1.5,理論塔板數符合色譜柱規格(如C18柱≥5000)。
2. 重復性驗證:連續5次進樣標準品,保留時間RSD≤1%,峰面積RSD≤2%。
3. 定量準確性:標準曲線回收率95%-105%,拖尾因子控制在0.95-1.05之間。
五、常見問題處理
1. 壓力異常:壓力驟升可能為管路堵塞,需反向沖洗或更換濾頭;壓力驟降多為漏液,需逐段檢查接頭。
2. 基線漂移:流動相未充分脫氣或柱溫波動導致,需重新超聲脫氣并穩定柱溫。
3. 峰形畸變:色譜柱老化或流動相pH不當引發拖尾,可更換色譜柱或調整緩沖液pH。
液相色譜的調試流程是一個復雜而精細的過程,需要嚴格按照上述步驟進行。調試過程中應注意細節控制,以確保液相色譜儀的最佳工作狀態。